土壤過氧化氫酶 （Solid- Catalase S- CAT）試劑盒說(shuō)明書 |
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土壤過氧化氫酶 （Solid- Catalase S- CAT）試劑盒說(shuō)明書 微量法 注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 規(guī)格 ： 100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容： 試劑一：液體 × 1 瓶，4℃保存； 臨用前加入29 .7mL 蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑4℃ 保存； 試劑二：粉劑× 1 瓶，4℃保存；臨用前加入1mL 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存； 試劑三：液體× 1 瓶，4℃保存。 產(chǎn)品說(shuō)明： S-CAT 是土壤微生物代謝的重要酶類，在H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。 H2O2 在240nm 下有特征吸收峰，通過測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化，即可 反應(yīng)S-CAT 活性的高低。 需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板 (UV 板) 和蒸餾水 操作步驟： -、 樣品處理： 新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。 、 測(cè)定步驟： 1 、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm ，蒸餾水調(diào)零。 2 、 加樣表 試劑名稱測(cè)定管無(wú)基質(zhì)管無(wú)土管 風(fēng)干土樣 (g)0.030.03 試劑一 (μL)260260 雙蒸水 (μL)260 25℃振蕩培養(yǎng) 20min 試劑二 (μL)101010 混勻 8000g ，25℃離心 5min ，取全部上清 試劑三 (μL)303030 混勻，取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中，240nm 處記錄各管吸光值A(chǔ)。 注意： 每個(gè)測(cè)定管要設(shè)一個(gè)無(wú)基質(zhì)管，無(wú)土管只要做一管。 三、 S-CAT 活性計(jì)算： A 、用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下 單位的定義：每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。 計(jì)算公式：S-CAT (μmol/d/g) ＝[(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V 反總÷ ( ε×d) × 106]÷W÷T= 16.5 × (A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管) V 反總：反應(yīng)體系總體積，3 × 10-4 L ；ε ：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36× 104 L / mol /cm；d： 比 色皿光徑，1cm； T ：反應(yīng)時(shí)間，20 min= 1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.03g。 B 、用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下 單位的定義：每天每g 風(fēng)干土樣催化1μmol H2O2 降解定義為一個(gè)酶活力單位。 計(jì)算公式：S-CAT (μmol/d/g) ＝[(A 無(wú)土管-A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管)×V 反總÷ ( ε×d) × 106]÷W÷T=33 × (A 無(wú)土管－A 測(cè)定管+A 無(wú)基質(zhì)管) V 反總：反應(yīng)體系總體積，3 × 10-4 L ；ε ：過氧化氫摩爾消光系數(shù)，4.36× 104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm； T ：反應(yīng)時(shí)間，20 min= 1/72d； W：樣品質(zhì)量，0.03g。 從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
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